【培养体系】：DMEM/F12(CellCook cat:CM2012,或同配方)+ 10%胎牛血清(CellCook cat:CM1002L,或更高级别)；或配套完全培养基(CellCook cat:CC9007M)

【传代比例】：1:3传代（培养面积比）

【传代方式】：先收集悬浮细胞，再用0.25%含EDTA胰酶消化1-2分钟收集贴壁细胞

【换液频率】：2~3天换液1次

【冻存配方】：DMEM/F12 +10%FBS+10%DMSO

【难度等级】：++

【形态特性】：贴壁悬浮混合型细胞，贴壁悬浮比例不固定。悬浮细胞为圆形，贴壁细胞多呈现圆形、梭形、多边形等不规则形态

✅ ：BV2细胞对培养条件较敏感，需要使用品质好一些的血清，日常培养需注意培养基颜色变化，培养液明显变黄则看情况及时换液，培养液偏紫需要检查CO2供应情况。

✅：BV2细胞在培养过程中出现细胞触角变多、细胞贴壁牢固消化时间明显变长、细胞增殖越来越慢甚至是停止生长的情况提示细胞分化，可在传代时将贴壁异常牢固难消化的细胞直接丢弃，保留未分化部分细胞继续培养几代看是否有改善。

✅ ：细胞贴壁悬浮比例不固定，如果圆形细胞数量较少则需要确定是否存在传代或换液时忘记收集而损失了悬浮部分细胞或综合细胞形态变化及生长活力等情况综合判断是否分化严重。传代时注意消化时间和吹打力度，消化过度或者吹打太剧烈易刺激细胞分化或导致细胞破碎损伤。

相关模型诱导

 

 

（来源：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/25800044/）

       在经典的 M1 状态下，暴露于 LPS 和/或 IFN-γ 会分别刺激 TLR4 或 IFN-γ 受体 1 与 2，从而激活转录因子 NF-κB 和 STAT1，并上调 CD86 和 MHC-II 的表达。iNOS 的增加会产生大量活性氮（RNS），并释放促炎细胞因子，如 IL-1α、IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-12、IL-23，以及趋化因子 CCL2、CCL20，还有受体 CCR2、具有胶原结构的巨噬细胞受体（MARCO）和 COX2。

       M2 状态可由多种刺激因素诱导形成。例如，在 IL-4/IL-13 刺激下，IL-4 受体（IL-4R）的结合会启动 STAT6 激活，使细胞向抗炎表型转化，表现为 Arg-1 增加，CD206 和甘露糖受体（MR）表达上调，并释放抗炎因子（IL-4、IL-6、IL-10、IL-13、IL-1RA、FIZZ1 和 PPARγ）。细胞暴露于 IL-10 后，通过刺激 IL-10 受体 1 和 2 主要激活 STAT3，使细胞进入主要的免疫抑制状态，表现为 CD206 的表达及 IL-10、TGF-β、FIZZ1 和 PPARγ 的释放。

实验分组：分为对照组、OGD/R处理组。

细胞准备：将BV2细胞接种于合适的培养器皿中，培养至对数生长期。

诱导处理：

- 氧糖剥夺：将细胞培养基更换为无糖培养基，并置于无氧环境中，37℃孵育3h。

- 再恢复：结束氧糖剥夺后，将细胞培养基换回正常完全培养基，置于正常培养环境（37℃、5% CO₂）中再复氧培养24h。

检测指标：

- 细胞活力检测：采用CCK - 8法或MTT法检测细胞活力，评估OGD/R处理对细胞存活的影响 。

- 凋亡检测：通过流式细胞术检测细胞凋亡率，观察细胞凋亡情况 。

- 氧化应激指标检测：检测细胞内活性氧（ROS）水平、丙二醛（MDA）含量等氧化应激指标，了解细胞的氧化损伤程度 。

应用研究

 

 

神经炎症研究

模拟小胶质细胞活化过程、检测炎症因子(如TNF-α、IL-1β、IL-6)表达、研究炎症信号通路(如NF-κB、MAPK)

神经退行性疾病模型

阿尔茨海默病(Abeta处理)、帕金森病(MPTP/MPP+处理)、肌萎缩侧索硬化症、亨廷顿舞蹈症等

神经损伤与修复

缺血性脑损伤模型、创伤性脑损伤研究、神经修复与再生机制

药物筛选与开发

抗炎药物评价、神经保护剂筛选、血脑屏障通透研究

细胞信号与功能研究

小胶质细胞吞噬功能、细胞凋亡与自噬、氧化应激反应

病毒与感染研究

神经病毒感染模型、病毒与宿主相互作用

【参考文献】

[1]Orihuela R, McPherson C A, Harry G J. Microglial M1/M2 polarization and metabolic states[J]. British journal of pharmacology, 2016, 173(4): 649-665.

[2]Guo S, Wang H, Yin Y. Microglia polarization from M1 to M2 in neurodegenerative diseases[J]. Frontiers in aging neuroscience, 2022, 14: 815347.

[3]Guo K, Shang Y, Wang Z, et al. BRG1 alleviates microglial activation by promoting the KEAP1-NRF2/HO-1 signaling pathway and minimizing oxidative damage in cerebral ischemia–reperfusion[J]. International Immunopharmacology, 2023, 119: 110201.

【CELLCOOK赛库生物BV2细胞系部分引用文献】

①Wang N, Sun C, Yang Y, et al. Gut microbiota-derived indoleacetic acid attenuates neuroinflammation and neurodegeneration in glaucoma through ahr/rage pathway[J]. Journal of Neuroinflammation, 2025, 22(1): 179.

②Yang Y, Wang N, Xu L, et al. Aryl hydrocarbon receptor dependent anti-inflammation and neuroprotective effects of tryptophan metabolites on retinal ischemia/reperfusion injury[J]. Cell death & disease, 2023, 14(2): 92.

③Wang L, Ding J, Zhu C, et al. Semaglutide attenuates seizure severity and ameliorates cognitive dysfunction by blocking the NLR family pyrin domain containing 3 inflammasome in pentylenetetrazole-kindled mice[J]. International journal of molecular medicine, 2021, 48(6): 219.

④Gai C, Zhao Y, Xin D, Li T, Cheng Y, Jiang Z, Song Y, Liu D, Wang Z. Mechanistic Insights into the Role of OPN in Mediating Brain Damage via Triggering Lysosomal Damage in Microglia/Macrophage. Cells. 2023 Mar 9;12(6):854. doi: 10.3390/cells12060854. PMID: 36980197; PMCID: PMC10046941.

⑤Shang Y, Wang X, Su S, et al. Identifying of immune‐associated genes for assessing the obesity‐associated risk to the offspring in maternal obesity: A bioinformatics and machine learning[J]. CNS Neuroscience & Therapeutics, 2024, 30(3): e14700.

⑥Xue M T, Sheng W J, Song X, et al. Atractylenolide III ameliorates spinal cord injury in rats by modulating microglial/macrophage polarization[J]. CNS Neuroscience & Therapeutics, 2022, 28(7): 1059-1071.

⑦Le K, Song Z, Deng J, et al. Quercetin alleviates neonatal hypoxic-ischemic brain injury by inhibiting microglia-derived oxidative stress and TLR4-mediated inflammation[J]. Inflammation Research, 2020, 69(12): 1201-1213.

⑧Chen Z, Ruan F, Wu D, et al. Quercetin alleviates neonatal hypoxic-ischaemic brain injury by rebalancing microglial M1/M2 polarization through silent information regulator 1/high mobility group box-1 signalling[J]. Inflammopharmacology, 2025, 33(2): 865-883.

⑨Yang Y, Huang Y, Li J, et al. Chemerin 15 Enhances Microglial Phagocytosis to Attenuate Cerebral Ischemia-Reperfusion Injury through ChemR23/p38 MAPK Pathway[J]. iScience, 2025.

⑩Chen T, Sheng S, Chen J, et al. Identification and mechanistic analysis of neurovascular coupling related biomarkers for diabetic macular edema[J]. Frontiers in Molecular Biosciences, 2024, 11: 1332842.

⑪Wang L, Cai Z, Gu Q, et al. cGAS deficiency regulates the phenotypic polarization and glycolysis of microglia through lactylation in hypoxic-ischemic encephalopathy cell model[J]. Biochemical Genetics, 2024, 62(5): 3961-3976.

⑫Chibaatar E, Le K, Abdoulaye I A, et al. Melatonin ameliorates lipopolysaccharide-induced microglial inflammation via triggering SIRT1/HMGB1 signaling axis[J]. Journal of Molecular Neuroscience, 2021, 71(4): 691-701.

⑬Chai Z, Ma T, Li Y, et al. Inhibition of inflammatory factor TNF-α by ferrostatin-1 in microglia regulates necroptosis of oligodendrocyte precursor cells[J]. NeuroReport, 2023, 34(11): 583-591.

本文所述方法仅供参考，具体操作需结合实验室条件优化。