左图：赛库生物 L929(200X) 

右图：赛库生物 L929(100X）

（ATCC）

【RRID】：CVCL_0462

【别名】：NCTC 929; NCTC-929; NCTC929; NCTC-929L; L cell; L cells; L-cell; L-cells; L cell line; L; Strain L-929; L-929; L 929; L929; L929(NCTC); Clone 929; Earles's cells; Earle's L cells

【生长特性】：成纤维细胞样，贴壁生长

【培养体系】：MEM(CellCook cat:CM2015,或同配方) 10%马血清(CellCook cat:CM1001) 添加剂:1X 非必需氨基酸(CellCook cat:CM1008S/L)

【传代比例】：1:3传代（培养面积比）

【传代方式】：消化2-3分钟（用0.25%含EDTA胰酶）

【换液频率】：2~3天换液1次

【冻存配方】：MEM+10%马血清+1X 非必需氨基酸+10%DMSO

【难度等级】：++

（来源于ATCC）

培养操作

 

 

【传代】：

✅：Step 1：当细胞汇合度达80%时传代；

✅：Step 2：将旧培养液吸出，使用0.25%含EDTA胰酶置于 37℃培养箱中消化2-3分钟（镜下观察细胞变圆、间隙增大），待细胞变圆收缩成流沙状态脱落后加入含血清培养基终止消化，将消化下来的细胞收集到离心管中；

✅：Step 3：1000rpm离心5分钟，重悬后接种至新培养瓶。

【冻存】：

✅：Step 1：细胞汇合度80%以上，活力状态较好时，可消化收集细胞沉淀进行冻存。

✅：Step 2：细胞沉淀用适量 4 °C 冻存液【MEM(含10%马血清)+10%DMSO】重悬， 一瓶 T25 细胞冻存一管（1ml/管），梯度降温（4℃ 30分钟→-20℃ 1小时→-80℃过夜→液氮长期保存）或使用程序降温盒降温后再转移至液氮中保存。冻存管需标记细胞名称、代次、冻存日期。若使用无血清细胞冻存液可省去程序降温步骤，直接转入-80℃保存，但仍建议在-80℃放置24小时后再转移至液氮。

无血清细胞冻存液使用方法与使用效果参考下文链接→《无血清冻存液PK常规冻存液》

【复苏】：

✅：Step 1：液氮取出的细胞放入干冰或液氮中转移到细胞房，提前准备好相关试剂耗材。

✅：Step 2：取出冻存管置于室温挥发液氮30s（如放入干冰转移则不需要挥发液氮），再转移到 37 °C 水浴中迅速解冻（1分钟内）。为了减少污染的可能性，保持冻存管瓶盖在水浴液面之上。 一旦大部分内容物解冻，立即将冻管移出水浴，70%的乙醇消毒冻存管外壁。

✅：Step 3：将含细胞的冻存液转移到含 4-6mL完全培养基的离心管中，轻轻混匀，1000rpm离心5min去除DMSO ，重悬后接种（建议每个 T25 培养瓶添加 6-8ml 完全培养基）转移至培养瓶中静置培养，24小时后更换培养基（去除死亡细胞）。复苏后24小时内避免移动培养瓶，以促进贴壁。

培养要点

 

 

【CELLCOOK赛库生物L929细胞系部分引用文献】

●Du W, Jiang Y, Yan M, et al. Fabrication and evaluation of hybrid foam fire-extinguishing agent reinforced with nano-zirconia sol[J]. Journal of Sol-Gel Science and Technology, 2025: 1-9.

●Liu L, Luo H, Xie Y, Wang Y, Ren S, Sun H, Li D. IL-33/ST2 signalling promotes tumor growth by regulating polarization of alternatively activated macrophages. Cancer Biol Med. 2025 Mar 27;22(4):376–95. doi: 10.20892/j.issn.2095-3941.2024.0483. PMID: 40145895; PMCID: PMC12032832.

●Zhou H, Zhang X, Li B, et al. Fast and efficient identification of hyaluronidase specific inhibitors from Chrysanthemum morifolium Ramat. using UF-LC-MS technique and their anti-inflammation effect in macrophages[J]. Heliyon, 2023, 9(2).

●Luo Y, Xiong B, Liu H, Chen Z, Huang H, Yu C, Yang J. Koumine Suppresses IL-1β Secretion and Attenuates Inflammation Associated With Blocking ROS/NF-κB/NLRP3 Axis in Macrophages. Front Pharmacol. 2021 Jan 18;11:622074. doi: 10.3389/fphar.2020.622074. PMID: 33542692; PMCID: PMC7851739.

●Xu S, Yu Y, Zhang B, et al. Boron carbide nanoparticles for boron neutron capture therapy[J]. RSC advances, 2025, 15(14): 10717-10730.

●Su Q, Wei D, Dai W, et al. Designing a castor oil-based polyurethane as bioadhesive[J]. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces, 2019, 181: 740-748.

本文所述方法仅供参考，具体操作需结合实验室条件优化。